Posokhova E.A., Volskaya A.S.

I.Ya. Horbachevsky Ternopil State Medical University (сайт), Ternopil, Ukraine

Effect of thiotriazolinum and acetylcysteine on liver in healthy animals, and their antioxidant activity in vitro 

Резюме. Показано, что тиотриазолин и ацетилцистеин при повторном введении здоровым нелинейным белым крысам не влияют на показатели состояния печени (уровни АлАТ, АсАТ, щелочной фосфатазы, общего белка сыворотки крови, содержание гидроперекисей липидов, активность супероксиддисмутазы, каталазы, скорость микросомальных N-деметилазной и р-гидроксилазной реакций); ацетилцистеин способствует повышению содержанияТБК-активных продуктов, тиотриазолин – восстановленного глутатиона в печени. Антиоксидантная активность in vitro тиотриазолина превышает таковую ацетилцистеина.

Ключевые слова: печень, тиотриазолин, ацетилцистеин, антиоксидантная активность in vitro.

Summary. It is shown that thiotriazolin and acetylcysteine after their repeated administration to nonlinear healthy albino rats do not affect the status of the liver (levels of ALT, AST, alkaline phosphatase, total serum protein, content of lipid hydroperoxide, superoxide dismutase and catalase activity, speed of microsomal N-demethylase and p-hydroxylase reactions); acetylcysteine enhances the content of TBA-active products, thiotriazolin increases glutathione level in the liver. Antioxidant activity in vitro of thiotriazoline exceeds that of acetylcysteine.

Keywords: liver, thiotriazolin, acetylcysteine, antioxidant activity in vitro.

Популярный антипиретик/анальгетик парацетамол (ПАР) обладает существенным гепатотоксическим потенциалом [12]. В связи с этим актуальной проблемой является поиск эффективных способов предупреждения поражения печени, вызванного этим препаратом. Результаты исследований, проведенных нами ранее, свидетельствуют о том, что тиотриазолин в большей степени, чем ацетилцистеин, при их повторном (в течение 2, 7 и 14 дней) введении нелинейным белым крысам способен уменьшить степень поражения печени, спровоцированного введением токсической дозы ПАР [8, 9]. Установлено, что в механизмах гепатопротекторной активности препаратов важную роль играет их антиоксидантное действие [4, 7]. Вместе с тем для решения вопроса о возможном использовании препаратов с целью предупреждения негативного действия ПАР на печень важным представляется выяснение их влияния на состояние данного органа при повторном введении здоровым животным, как и исследование антиоксидантного потенциала тиотриазолина и ацетилцистеина in vitro.

Цель исследования– выяснение влияния тиотриазолина и ацетилцистеина на состояние печени здоровых животных и их антиоксидантной активности in vitro.

Материалы и методы

Исследование проведено на белых нелинейных крысах-самцах: 1-я группа – контроль (интактные животные), 2-я и 3-я группы получали соответственно тиотриазолин (ТИО, 100 мг/кг) и ацетилцистеин (АЦЦ, 150 мг/кг) (внутрибрюшинно, в течение 2 дней, при исследовании реакций микросомальной биотрансформации ксенобиотиков – в течение 2, 7 и 14 дней). В гомогенатах печени определяли содержание гидроперекисей липидов (ГПЛ) [2], ТБК-активных продуктов [1], активность супероксиддисмутазы (СОД) [10], каталазы (КАТ) [5], содержание восстановленного глутатиона [11], N-деметилазную и р-гидроксилазную активности микросом [3], в сыворотке крови – уровни аланинаминотрансферазы (АлАТ), аспартатаминотрансферазы (АсАТ), щелочной фосфатазы (ЩФ) и содержание общего белка (c использованием стандартных наборов реактивов). Полученные результаты подвергали статистической обработке с помощью программы Excel с использованием t-критерия Стьюдента.

Для исследования антиоксидантной активности препаратов in vitro использовали систему аутоокисления адреналина в адренохром в щелочной среде [6]. Раствор адреналина готовили на бидистиллированной воде, использовали только чистый кристаллический адреналин. Точную навеску адреналина (40,5 мг) вносили в мерную колбу на 100 мл и добавляли 50 мл бидистиллированной воды, после чего по 0,5–1 мл 0,1 н НСl, доводили рН до 2,0, затем бидистиллятом доводили объем до 100 мл. Рабочий объем доводили до 100 мл. В кюветы спектрофотометра толщиной 10 мм вносили 2 мл 0,15 М карбонатного буфера рН 10,2, содержащего 500 мг трилона Б на 1 л объема. После этого вносили растворы ТИО или АЦЦ в концентрациях 7×10–7, 18×10–8, 36×10–8 моль/л объемом до 0,5 мл. Реакцию запускали добавлением 0,4 мл раствора адреналина. Оптическую плотность определяли при длине волны 480 нм против карбонатного буфера. Антиоксидантную активность (АОА) рассчитывали по степени торможения аутоокисления адреналина в адренохром по формуле

АОА = (Е0 – Ек) / Е0 × 100 %,

где Е0 – оптическая плотность контрольного раствора, Ек – оптическая плотность исследуемого раствора.

Результаты и обсуждение

Проведенные исследования, результаты которых представлены в табл. 1, свидетельствуют, что ТИО и АЦЦ при их повторном введении здоровым животным достоверно не изменяли активность АлАТ, АсАТ, ЩФ, содержание общего белка в сыворотке крови, что говорит об отсутствии негативного влияния препаратов на состояние клеточных и субклеточных мембран гепатоцитов, холестатического компонента, о сохранности белоксинтетической функции печени.

Таблица 1. Влияние ТИО и АЦЦ при их повторном введении здоровым животным на активность аминотрансфераз, щелочной фосфатазы, содержание общего белка в сыворотке крови (n = 6, M ± m)

П р и м е ч а н и е: р – достоверность разницы относительно контроля; * р > 0,05; ** р < 0,05.

При повторном введении здоровым животным ТИО содержание гидроперекисей липидов, ТБК-активных продуктов в печени находились на уровне контроля (табл. 2). АЦЦ не менял содержание гидроперекисей липидов в печени здоровых животных, однако способствовал достоверному возрастанию в органе (на 10,4%) ТБК-активных продуктов.

Таблица 2. Влияние ТИО и АЦЦ на некоторые показатели системы прооксиданты/антиоксиданты в печени здоровых животных (n = 6, М ± m)

П р и м е ч а н и е: р – достоверность разницы относительно контроля; * р > 0,05; ** р < 0,05.

ТИО и АЦЦ не оказывали существенного влияния на активность антиоксидантных ферментов СОД и КАТ. Вместе с тем при применении ТИО увеличивалось содержание восстановленного глутатиона в гомогенатах печени (на 5,6%), что можно объяснить увеличением резервов этого компонента антиоксидантной системы.

ТИО и АЦЦ при их повторном введении достоверно не изменяли N-деметилазную и р-гидроксилазную активности в печени здоровых животных по сравнению с контролем (табл. 3).

Таблица 3. Влияние ТИО и АЦЦ при их повторном введении здоровым животным на активность N-деметилазной и р-гидроксилазной реакций в печени (М ± m)

П р и м е ч а н и е: р – достоверность разницы относительно контроля; * р > 0,05.

Оценку АОА соединений проводили на модели ингибирования образования супероксид-анион-радикала по методике, описанной выше.

Проведенные исследования in vitro, результаты которых представлены в табл. 4, свидетельствуют о наличии АОА у обоих препаратов. Причем наиболее высокой у ТИО и АЦЦ она оказалась при их концентрации в среде исследования 18?10^–7 моль/л. При сравнении свойств препаратов установлено, что во всех исследуемых дозах АОА активность ТИО была выше по сравнению с АЦЦ соответственно на 49,4; 10,8 и 9,0%.

Таблица 4. Сравнительная характеристика антиоксидантной активности ТИО и АЦЦ invitro

Выводы:

1. Тиотриазолин и ацетилцистеин при их повторном введении здоровым животным не изменяют активность аминотрансфераз, содержание общего белка в сыворотке крови, содержание гидроперекисей липидов, активность супероксиддисмутазы и каталазы в печени.

2. Ацетилцистеин при его повторном введении здоровым лабораторным нелинейным крысам способствует активации процессов перекисного окисления липидов в печени, о чем свидетельствует возрастание содержания продуктов, реагирующих с тиобарбитуровой кислотой.

3. Тиотриазолин при его повторном введении здоровым животным вызывает повышение содержания в их печени восстановленного глутатиона.

4. Тиотриазолин и ацетилцистеин не влияют на активность N-деметилазной и р-гидроксилазной реакций в печени здоровых животных.

5. Тиотриазолин и ацетилцистеин проявляют антиоксидантную активность in vitro, которая в наибольшей степени регистрируется при концентрации препаратов 18?10^–7 моль/л.

6. Тиотриазолин не оказывает отрицательного влияния на состояние печени здоровых животных, а при исследовании in vitro проявляет более высокую антиоксидантную активность по сравнению с ацетилцистеином.

Л И Т Е Р А Т У Р А

1. Андреева, Л.И. Модификация метода определения перекисей липидов в тесте с тиобарбитуровой кислотой / Л.И. Андреева, Л.А. Кожемякин, А.А. Кишкун // Лабораторное дело. – 1988. – № 11. – С. 41–43.

2. Гаврилов, В.Б. Спектрофотометрическое определение содержания гидроперекисей липидов в плазме крови / В.Б. Гаврилов, М.И. Мишкорудная // Лабораторное дело. – 1983. – № 3. – С. 33–35.

3. Карузина, И.И. Выделение микросомной фракции печени и характеристика ее окислительных систем / И.И. Карузина, А.И. Арчаков // Современные методы в биохимии / под ред. В.Н. Ореховича. – М.: Медицина, 1977. – С. 49–62.

4. Клиническое применение тиотриазолина в терапии / И.А. Мазур [и др.] // Сучасна гастроентерологія. – 2005. – № 5 (25). – C. 76–79.

5. Метод определения активности каталазы / М.А. Королюк [и др.] // Лабораторное дело. – 1988. – № 1. – С. 16–19.

6. Методи оцінки антиоксидантних властивостей фізіологічно активних сполук при ініціюванні вільно радикальних процесів in vitro (метод. рекомендації) / Ю.І. Губський [та ін.]. – Киев: ДФЦ МОЗ України, 2002. – 26 с.

7. Механізм енерготропної та антиоксидантної дії тіотриазоліну [Електроний ресурс] / І.Ф. Бєленічев [та ін.] // Новости медицины и фармации. – 2008. – № 13–14. – Режим доступу: http://novosti.mif-ua.com/archive/issue-5680/article-5699/print.html.

8. Посохова, К.А. Вплив тіотріазоліну й ацетилцистеїну на стан печінки при її ураженні парацетамолом / К.А. Посохова, А.С. Вольська, І.А. Демчук // Запорожский мед. журн. – 2010. – Т. 12, № 5. – С. 195–197.

9. Посохова, К.А. Профілактика гепатотоксичної дії парацетамолу за допомогою тіотриазоліну та ацетилцистеїну / К.А. Посохова, А.С. Вольська // Україн. біофармацевт. журн. – 2012. – № 5–6 (22–23). – С. 42–47.

10. Чевари, С. Роль супероксиддисмутазы в окислительных процесах клетки и метод определения ее в биологических материалах / С. Чевари, И. Чаба, И. Секей // Лабораторное дело. – 1985. – № 11. – С. 678–681.

11. Ellman, G.L. Tissue sulfhydryl groups / G.L. Ellman // Arch. Biochem. Biophys. – 1959. – Vol. 82. – Р. 70–77.

12. Sarrell, E.M. Antipyretic treatment in young children with fever: acetaminophen, ibuprofen, or both alternating in a randomized, double-blind study / E.M. Sarrell, E. Wielunsky, H.A. Cohen // Arch. Pediatr. Adolesc. Med. – 2006. – Vol. 160, N 2. – P. 197–202.

Медицинские новости. – 2013. – №6. – С. 85-87.

Внимание! Статья адресована врачам-специалистам. Перепечатка данной статьи или её фрагментов в Интернете без гиперссылки на первоисточник рассматривается как нарушение авторских прав.