Drogovoz Y.V., Zaychenko A.V.

Institution of Advanced Training of Pharmacists of the National University of Pharmacy, Kharkоv, Ukraine

Morphologic efficacy assessment of the new vaginal cream with terbinafine

Резюме. Одна из причин высокой распространенности и низкой эффективности лечения неспецифических инфекционно-воспалительных заболеваний нижних отделов генитального тракта – формирование резистентности микроорганизмов, в том числе патогенних грибов к химиотерапевтическим препаратам. В статье освещены результаты фармакологического изучения вагинального крема комбинированного состава «Тербиклин», содержащего антибиотик клиндамицин и антимикотик тербинафин. В исследованиях на животных доказана эффективность тербиклина. Полученные результаты дают основания для дальнейших клинических исследований нового крема с целью расширения ассортимента топикальных лекарственных средств для лечения неспецифических вагинитов.

Ключевые слова: вагинит, вагинальный крем, тербинафин, клиндамицин, морфологическое исследование.

Summary. In the practice of the up-to-date obstetrician-gynecologist one of the most topical issues is a high prevalence and low efficiency of the treatment of non-specific infectious and inflammatory diseases of the lower genital tract. One of the reasons for such a negative trend is the formation of resistance of microorganisms, including pathogenic fungi, to chemotherapeutic drugs. The article highlights the results of the pharmacological study of Terbiclin – the new vaginal cream of the combined composition containing the antibiotic clindamycin and antifungal terbinafine. Animal studies proved the efficacy of Terbiclin. The received findings provide a basis for further clinical studies of the new cream for the purposes of extension of the line of the topical medical products for treatment of nonspecific vaginitis.

Keywords: vaginitis, vaginal cream, terbinafine, clindamycin, morphological study.

В структуре гинекологической патологии за последнее десятилетие значительно возрос удельный вес неспецифических инфекционно-воспалительных заболеваний нижнего отдела генитального тракта. Этиологическим фактором патологии все чаще стала выступать условно-патогенная микрофлора биотопа влагалища [3, 7]. При определенных обстоятельствах (вредные условия труда, погрешности в питании, несоблюдение правил личной гигиены, длительный прием контрацептивов, глюкокортикостероидов и т.п.) наблюдается снижение иммунитета, что является пусковым механизмом в активации роста условно-патогенной микрофлоры [1, 3]. Грибы также состоят в числе микроорганизмов, находящихся в симбиозе с организмом человека [2, 10]. При этом чаще наблюдается доминирование не одного, а нескольких микроорганизмов, формирующих микробные ассоциации. Индигенная микрофлора становится патогенной и способствует развитию воспалительного процесса во влагалище [12]. На фоне вагинитов осложняется течение гестационного процесса, увеличивается риск внутриутробного инфицирования плода и послеродовых септических осложнений.

Фармакологическая коррекция вагинитов подразумевает использование препаратов, обладающих и антибактериальным, и противогрибковым действием. Для этих целей применяют как монопрепараты, так и комбинированные лекарственные средства в различных лекарственных формах, в том числе для топического лечения – мази, суппозитории (пессарии), вагинальные таблетки. В качестве антифунгальных средств наиболее часто используют производные азолов (кетоконазол, клотримазол, флуконазол и т.д.), однако в последнее время к ним отмечено развитие резистентности патогенных грибов [9, 11, 14]. Учитывая тот факт, что перечень антимикотиков широкого спектра действия весьма ограничен, актуальна разработка новых вагинальных лекарственных форм, в состав которых входит производное алиламинов – тербинафин. Последний до настоящего времени входил в состав лекарственных средств исключительно для лечения дерматомикозов. Тербинафин обладает высокой терапевтической эффективностью, хорошей переносимостью у пациентов, медленным формированием резистентности у грибов [13].

Цель исследования – изучение лечебного действия вагинального крема тербиклин, в состав котрого входит клиндамицин и тербинафин, на модели травматического бактериально-грибкового вагинита у крыс.

Материалы и методы

Технология нового вагинального крема разработана доктором фармакологических наук, профессором Н.А.Ляпуновым. Терапевтическую эффективность тербиклина изучали на модели травматического бактериально-грибкового вагинита у крыс в сравнении с препаратом «Вагиклин» (Erica Pharma Pvt. Ltd.), содержащим в своем составе клиндамицин и клотримазол. Модельную патологию воспроизводили согласно методическим рекомендациям государственного фармакологического центра министерства здравоохранения Украины [6].

Для эксперимента были использованы 32 белые нелинейные самки крыс, массой 170–200 г. Все животные были разделены на 4 группы по 8 особей в каждой. В первую группу (интактный контроль) были включены здоровые животные. Во вторую (контрольная патология) – животные, которым моделировали травматический бактериально-грибковый вагинит. В третью группу входили животные, которым на фоне травматического бактериально-грибкового вагинита проводили лечение новым вагинальным кремом «Тербиклин». В четвертую группу входили животные, которым экспериментальный вагинит лечили референтным препаратом «Вагиклин». Все исследуемые препараты вводились в лечебном режиме один раз в сутки на протяжении 6 дней (с 6-го по 11-й день эксперимента). Все манипуляции с животными проводились в соответствии с этическими нормами и правилами «Европейской конвенции по защите позвоночных животных, которых используют для экспериментальных и научных целей» [8]. Оценка эффективности терапии исследуемыми препаратами проводилась по изменению клинических показателей периферической крови (количество лейкоцитов и СОЭ) и по данным гистологического исследования слизистой оболочки влагалища (СОВ) крыс. Забор периферической крови из хвостовой вены животных призводили на 12-й день эксперимента, после чего животных выводили из опыта и получали образцы СОВ. Образцы ткани фиксировали в 10% растворе формалина, обезвоживали в спиртах возрастающей крепости, заливали в целлоидин-парафин. Срезы для обзорной микроскопии окрашивали гематоксилином и эозином, для обнаружения гликогена ставили ШИК- реакцию [4, 5]. Микропрепараты осматривали под микроскопом Micros 400. Микрофотографирование препаратов выполняли цифровым фотоаппаратом Nicon Col Pix 4500. Фотоснимки обрабатывали на компьютере Pentium 2,4GHz с помощью программы Nicon View 5.

Результаты и обсуждение

Для подтверждения фармакологической активности изучаемых препаратов были оценены показатели периферической крови, отображающие активность воспалительного процесса, а именно уровень лейкоцитоза и скорость оседания эритроцитов (СОЭ) (таблица). На 12-й день эксперимента количество лейкоцитов у животных группы контрольной патологии увеличилось 1,4 раза по сравнению с интактными животными, СОЭ возросла в 2,8 раза. У самок, леченных новым вагинальным кремом «Тербиклин», показатель лейкоцитоза после 6-дневного курса лечения был достоверно ниже в 1,5 раза идентичного показателя у животных из группы контрольной патологии. СОЭ у животных данной группы снизился в 2,2 раза относительно показателей самок с экспериментальной патологией. Под действием препарата сравнения уровень лейкоцитоза также снизился – в 1,25 раза, СОЭ – в 1,8 раза. Динамика гематологических маркёров острого воспаления у животных, леченных тербиклином, свидетельствует о более выраженном терапевтическом эффекте тербиклина в сравнении с вагиклином.

Важное значение для верификации терапевтической активности нового вагинального крема, содержащего клиндамицин и тербинафин, отводится морфофункциональному состоянию слизистой оболочки влагалища крыс. Углубленное гистологическое исследование СОВ дает возможность объективно оценить фармакологическую эффективность местного лечебного действия исследуемых препаратов.

При изучении структурной организации СОВ у крыс из группы интактного контроля наблюдалось соответствие ее физиологической норме. В ткани влагалища хорошо определялись все слои: слизистая, мышечная и адвентициальная оболочки. В слизистой оболочке был четко виден эпителиальный покров нормальной структуры, собственная пластинка слизистой и подслизистая соединительнотканная прослойка. Подслизистый слой имел вид рыхлой волокнистой ткани, содержащей небольшое количество лейкоцитов, фибробластов и мелких кровеносных сосудов венозного типа. Адвентициальная оболочка также содержала кровеносные сосуды разного калибра и состояла из рыхлой волокнистой ткани (рис. 1).

У животных из группы контрольной патологии на 12-й день эксперимента СОВ была патологически измененной. При микроскопическом изучении отмечались различные по размеру и глубине эрозивные дефекты, поверхность которых была заполнена клеточным детритом. Эпителиальный пласт отсутствовал практически на всей поверхности СОВ, волокна стромы слизистой – отечные. Подслизистый слой расширен, в нем отмечалась выраженная воспалительная реакция, местами среди скоплений характерных воспалительных элементов и клеток (лейкоцитов) наблюдались тонкостенные кровеносные сосуды. Такая морфологическая картина соответствует начальным фазам образования грануляционной ткани. Признаки воспаления были зафиксированы и в мышечной, и в адвентициальной оболочках. В большинстве кровеносных сосудов наблюдалось краевое расположение клеток крови (рис. 2). Выраженное воспаление стромы определялось и на небольших участках слизистой вне зон деструкции. Признаки воспаления, такие как акантоз, акантолиз, очаговый экзоцитоз, прослеживались и в сохраненном покровном эпителии. Помимо этого отмечалось нарушение физиологического процесса ороговения (дискератоз). В цитоплазме шиповатых клеток отмечалось либо полное отсутствие, либо значительное снижение количества гликогена.

Результаты исследования морфофункционального состояния СОВ крыс после лечения вагинальным кремом тербиклином свидетельствуют об отсутствии деструктивных воспалительных изменений у 70% крыс. У большинства животных структурная организация эпителия соответствовала нормальной фазе «эструс» эстрального цикла. Клетки функционального и промежуточного слоев активно накапливали гликоген (рис. 3). У 30% самок сохранялись единичные проявления воспаления.

После лечения референтным препаратом «Вагиклин» состояние СОВ животных также значительно улучшилось по сравнению с животными группы контрольной патологии. Однако признаки инфекционно-воспалительного процесса сохранялись у 50% крыс. Хотя у некоторых самок местами толщина эпителиального пласта увеличивалась и в нем определялись проявления акантоза, акантолиза, вакуольной дистрофии (рис. 4), все же способность к накоплению гликогена у данных клеток была сохранена. Состояние собственной пластинки слизистого и подслизистого слоев было ближе к нормальному, местами сохранялись отдельные признаки воспалительной реакции.

Влияние тербиклина и вагиклина на показатели периферической крови у крыс

на модели травматического бактериально-грибкового вагинита, (Χ±S_χ)

П р и м е ч а н и я : ¹ – статистически значимое отклонение по отношению к животным группы интактного контроля (р≤0,05); ² – статистически значимое отклонение по отношению к животным группы контрольной патологии (р≤0,05); ^2\3 – статистически значимое отклонение по отношению к животным, которые получали референтный препарат «Вагиклин» (р≤0,05)

Таким образом, введение животным с экспериментальным травматическим бактериально-грибковым вагинитом нового вагинального крема «Тербиклин» приводит к полному устранению явлений системного воспалительного ответа и эффективно купирует признаки локального инфекционно-воспалительного процесса, что подтверждено результатами морфологического изучения слизистой оболочки вагины. По эффективности лечебного действия новый вагинальный крем, содержащий комбинацию клиндамицина и тербинафина, превосходит препарат сравнения «Вагиклин». Полученные результаты дают основания для дальнейшего углубленного изучения тербиклина, с последующим внедрением его в клиническую практику с целью расширения ассортимента лекарств для топического лечения неспецифических вагинитов.

Л И Т Е Р А Т У Р А

1. Анкирская А.С. // Гинеколог 2005. – №4. – С.15–18.

2. Буданов П.В. // Вопр. гинекологии акушерства и перинатологии. – 2005. – Т.4, №4. – С.13–16.

3. Воропаева Е.А., Афанасьев С.С., Кудрявцева М.В. и др. // Журн. микробиол. – 2005. – №3. – С.65–69.

4. Кононский А.И. Гистохимия. – Киев, 1976. – 280с.

5. Меркулов Г.А. Курс патологогистологической техники. – М.: Медицина, Ленингр. отд., 1969. – 424с.

6. Методы экспериментального изучения БАВ на моделях вульвовагинита: метод. рекоменд. – Киев, 2003. –7 с.

7. Сидорова И.С., Боровкова Е.И. Микрофлора половых путей у женщин репродуктивного возраста. – М., 2007 – 80 с.

8. Commission of the European Communities: Council Directive of 18 December 1986 on the Lows, regulating the Application of Principles of Good Laboratory Practice and the Verification of Their Applications for Tests on Chemical Substances (87/18/EEC). The Rules Governing Medicinal Products in the European Community/ – 1991. – Vol.1. – P.145–146.

9. Evans E.G.V. // Rev. Contemp. Pharmacother. – 1997. – Vol.8. – P.325–341.

10. Hainer B.L., Gibson M.V. // Am. Fam. Physician. – 2011. – Vol.83, N7. – P.807–815.

11. Linda O., Eckert L.O., M.D. // N. Engl. J. Med. – 2006. – Vol.355, N12. – P.1244–1252.

12. Linhares I.M., Giraldo P.C., Baracat E.C. // Rev. Assoc. Med. Bras.–2010.– Vol.56, N3. – P.370–374.

13. Ryder N.S. // Rev.Cont.Pharmacother. – 1997. – Vol.8. – P.275–288.

14. Schдfer-Korting M., Schoellmann C., Korting H.C. // Skin Pharmacol. Physiol. – 2008. – Vol.21. – P.203–210.

Медицинские новости. – 2013. – №4. – С. 71-74.

Внимание! Статья адресована врачам-специалистам. Перепечатка данной статьи или её фрагментов в Интернете без гиперссылки на первоисточник рассматривается как нарушение авторских прав.